请教一题分子生物学考研试题!!!

wuyi4689 · 发表于 06-11-2 09:46:18

如何进行单链DNA的克隆?

请说仔细一点,谢谢![s:7][s:7]

fgh1234 · 发表于 06-11-20 21:10:06

采用PCR人工进行单链扩增，合成双链，用载体连接，转化不就行了吗

Hazel_fang · 发表于 06-11-23 02:24:44

你的題目...怎麼甚麼條件都沒有啊....也沒說是要做DNA library還是site mutation cloning...還要說仔細一點...faint....
okie..
看你要用甚麼方法去進行clone了. 可以用PCR(in vitro)或者是cell based (in vivo).如果要施行很精密的clone,DNA的size也很重要.
single-stranded DNA如果小過23Kb
1. construct a vector. 可以用phagemid vector或者是M13 vector. 一般vector需要有以下幾個特徵a)under strong promotor; b) have an indicater; c) have a Multiple cloning site (MCS)
2. constuct了vector以後要進行trasfection.Indicater可以指出那一個colony是success transfected.
3. Electrophoresis. 檢查success colony是不是含有Target DNA.

max-19831108 · 发表于 06-12-18 11:54:09

什么呀

猪八戒 · 发表于 06-12-18 18:42:42

最简单的方法就是用不等额PCR扩增法了，两种引物的量不等，这样就可以扩增出目的单链DNA了

aidinglun · 发表于 06-12-18 21:34:19

也可以用M13为噬菌体

Culerpica · 发表于 07-2-6 21:05:05

不对称ＰＣＲ

花仙子2008 · 发表于 13-1-2 15:12:12

除了上面讲的，也可以直接拥有有机化学方法合成DNA单链。

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